Silver staining Polyacrylamide Gel for MALDI/TOF-MS^(A)

1. ゲル固定液を作成する．

   ゲル固定液
   酢酸	EtOH	BS 水	total
   25 ml	75 ml	100 ml	250 ml

   
   
2. 泳動済みのアクリルアミドゲルを、ゲル固定液を入れた適切な大きさの容器に、ガラス板から外しながら移す．18x18cmサイズのゲルの場合、20x20のNuncの角シャーレを用いて、一回あたり200ml程度使用．
3. 途中で１回〜数回、固定液を変えて（ゲルに付いたゴミなどをとるため）、３時間〜一晩ゆっくり室温で振盪する．

   （洗浄〜活性化）

4. rinse: 20% EtOH（容器A:40ml EtOH + 160ml BS water /gel）で20分間振盪．
5. wash: BS水で10分間振盪（容器A: 200ml/gel）
6. sensitization: 0.02% チオ硫酸ナトリウム（容器A:10% sodium thiosulfate 400 μl+ 200ml BS water/gel）で10分間振盪

   （銀染色）※複数のゲルがあるときは１枚ずつ行うこと

7. rinse: BS水（容器A: 200ml/gel）で20秒間ずつ３回すすぐ．
8. silver incubation: 硝酸銀溶液（容器B: AgNO3, 0.4 g+BS water 200ml/gel）を加え、45分間振盪

   （発色）

9. 銀溶液を専用の銀廃液ビン^(B)に捨てる．
10. wash: BS 水（容器B: 200ml/gel）で5〜10秒すすぐ（廃液→銀廃液へ）
11. develop: 発色液（容器A:K2CO3, 6.0g＋10% sodium thiosulfate 20μl＋200ml BS water/gel, 使用直前にホルマリン50μlを加える）を加え、発色の程度を見ながら５〜10分間振盪する．（廃液→銀廃液へ）
12. Fixation: 停止液（容器C: Tris base 10g＋酢酸5ml＋BS water 200ml/gel）を加え５分間振盪（廃液→銀廃液へ）
13. rinse: BS水（容器B:200ml/gel）で10分間ずつ２回洗浄（廃液→銀廃液へ）
14. rinse: 途中２回ほどBS水を替えながら振盪し洗浄（廃液は流しに流してよい）
15. スキャナーなどでゲルを撮像し記録する．ゲルはBS水に漬した状態で4℃保存する．
    この状態で数カ月は in gel digestion→TOF-MSによる解析が可能．

1. MALDI/TOF-MSを用いたpeptide mass finger printingのための銀染色．
   グルタルアルデヒドを用いた銀染色ではMS解析が不可能なのでこの方法を用いる．
2. ガラスびんにconc.HClを入れておき塩化銀として沈殿させる．廃液がいっぱいになってきたら上清を酸廃液として捨てる．
   何回かに一度，HClは補充すること．

2002.2.27: 旦部. 作成