現在我々の研究グループで行っている主要なプロジェクト

方法論

プロジェクト

1) ジーンターゲティングによるdrs 遺伝子の機能解析

　drs のfirst exon を含むmouse genomic clone を用いてジーンターゲティングを行いdrs遺伝子欠損マウスを作製し、個体レベルでdrs遺伝子が悪性化形質の発現にどのように関わっているのか、また発生や正常細胞におけるdrs遺伝子の機能の解析を行っている。

2) トランスジェニックマウスの作製によるdrs 遺伝子の機能解析

　Wild type drs 遺伝子、細胞内ドメインを欠いたdrs 遺伝子、および細胞外ドメインの３つのSushi motif を欠いたdrs 遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを作製し、in vivo でのdrs 遺伝子機能およびそれぞれのドメイン機能を検討している。様々なウイルス遺伝子の個体における機能解析もこの実験系を用いて行える。　

3) プロテオミクスによるDrs蛋白に結合する蛋白の同定とその機能解析

　Drs蛋白の機能発現と癌化抑制のメカニズムを明らかにするためにtagを導入したdrsを高発現させる実験系およびDrs のリコンビナント蛋白の系を確立し、特異抗体による免疫沈降法とペプチドマスフィンガープリント法を用いてDrsと結合する蛋白の検索と同定を行っている。現在までに複数のDrsと共沈する蛋白を検出しており、これらのDrs 結合蛋白の機能とDrsの機能発現との関連について解析を行っている。

4) レトロウイルスベクターを用いたdrs遺伝子の機能解析

　我々はヒトを始めとする動物細胞に効率よく遺伝子を導入できるレトロウイルスベクターのシステムを確立している。この系を用いて様々なヒト悪性癌細胞株にwild type および種々のdeletion mutants のdrs 遺伝子を導入しその癌化抑制活性を解析している。またこの実験系はヒト、ラット、マウスの初代培養細胞など様々な細胞におけるウイルス癌遺伝子の機能解析にも 用いている。将来的には癌の遺伝子治療にも発展させてゆきたい。

5) In situ hybridization 法によるヒト癌組織におけるdrs 遺伝子発現の解析

　種々のヒト癌組織におけるdrs mRNA の発現をin situ hybridization 法およびNorthernblotting 法によって検討し、癌組織における悪性化の程度や他の癌遺伝子、癌抑制遺伝子の変異、ウイルス癌遺伝子の発現とdrs遺伝子の発現との関連を検討している。

6) Drs 転写調節領域の機能解析

　癌遺伝子によるdrs 遺伝子発現抑制機構を明らかにするためにdrs の5' 上流転写調節領域をクローニングしCAT reportor plasmid に組み込みv-src, activated ras などの癌遺伝子 によるdrs の発現抑制の分子機構の解析を行っている。